ELISA试验时留意以下几个方面

ELISA试验时留意以下几个方面ELISA试剂盒操作较冗繁,在操作中应留心以下5个方面。1. 跟着病况的开展或由其他要素影响，某些抗体在机体内的含量发作大幅动摇，因此有必要对标本进行预处理。直接法测定中，标本恰当稀释还可下降非特异性反应。2. 洗刷是操作进程中抉择试验成败的一个关键进程。目的是除去未联络的免疫反应物，中止抗原抗体反应，除去标本中与反应无关的成分、游离的酶标物以及反应进程中吸附于固相载体上的非特异性物质。可用洗板机洗板或手工洗板，前者洗刷质量较好，各反应孔洗刷效果均一，批内、批间差异小，手工洗板应留心操控各孔洗刷效果，差异不宜太大。3. 准确判定效果须运用ELISA试剂盒测读仪，比色法判读可选择单波长或长，根据反应液颜色的不一样选用不一样波长的滤光片，以空白孔校零测定反应孔的吸光度值。酶标仪具有出色的重复性。4. ELISA试剂盒加样一般运用加液器，在ELISA试剂盒中一般有4次加样：加标本、加酶联络物、加底物和加中止液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴，避免穿插污染。加酶联络物、底物和中止液时则不需更换吸嘴。5. 在成批手工查看中，还应留心操作时差的影响。加样及混匀时间的差异，使抗原抗体反应和酶促反应时间不一致，对竞争法及定量查看影响很大，不留心可能会致使过错效果或定量禁绝。ELISA试剂盒测定进程：固相包被→加待测样品→温育→洗刷+加酶标物→温育→洗刷→加底物→温育一加中止液→比色→判定效果。