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新西兰血源胎牛血清解冻和灭火

​​解决血清使用中的常见问题

新西兰血源胎牛血清解冻和灭火

1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损？

将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。

长时间储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。

我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

新西兰血源胎牛血清解冻和灭火

2、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理？

沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清（400g，1-2分钟）或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里（一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。

3、实验室如何选择适合的血清？

国内一致认为HYCLONE的血清是最好的，但是根据我在北美的经历，国外一般认为GIBCO比HYCLONE好，所以并不是价格决定质量，但是总的来说这两种价格普遍偏贵，一般不是太娇气的细胞，国产的就够用了 。此外，由于国内HYCLONE，GIBCO并没有生产线，我们只能从代理商那里买，而代理商又鱼龙混杂，所以买到假货的可能性也很大。所以，我一般会从直销员那里买血清，有的国外生物公司由于刚刚进入米6体育，知名度不高，但是其实在 国外已经做得很不错了，如Wisent等，他们在国内有办事处，我会从那里拿，血清的品质和HYCLONE不相上下，但价格相对优惠很多。

4、 如何避免血清中产生沉淀？

按如下操作可避免沉淀的产生：

（1）解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

（2） 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一。

（3） 勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

（4） 勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。

（5） 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

（6） 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

5、 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

新西兰血源胎牛血清解冻和灭火

6、 为什么要热灭活血清?

加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

7、 有必要做热灭活吗?

实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量!

8、细胞培养中出现黑点是污染吗？如何处理？

一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会米6体育变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：

（1）细胞生长过老，破碎的细胞残骸；

（2）血清质量不好，反复冻融的结果；

（3）配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长；

（4）配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点；

（5）培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

9、 细胞培养中如何防止黑点生成？

（1） 尽可能地减少血清冻融次数。

（2） 培养基无需37℃水浴。

（3） 培养基保持最佳PH值7.0- 7.2。

（4） 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。

（5） 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。

1、 化冻

将血清从-20度冰箱中取出，室温（或浸于自来水中）化冻（约需要30分钟至2小时，也可放于4度冰箱化冻过夜；化冻后若不马上灭活，可以放入4度冰箱中暂时保存）

2、灭活

（1）放入室温的水浴锅内开始加热（同时放入一个空的血清瓶，内装100ml自来水，插入一根温度计，温度监控以此为准）

（2）当温度计显示56度时，停止加热，改为间断加热，维持56度（±0.5度）30分钟（±3分钟；若不小心使温度上升超过56度，则：若仍未超过60度，且时间很短，比如不超过5分钟，则仍可使用；若超过60度，或者时间较长，则弃去不用，或者尝试用于一些普通细胞的培养）

（3）取出，自然冷却至室温（约需1-3小时），可分装或-20度继续冻存。

3、分装

（1）转入无菌间，在超净台内将血清分装入10ml离心管中（注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀；用吸液管或吹大管吹出血清时要注意：不要吹出气泡（血清很粘稠，很容易产生气泡；如果产生气泡，则在酒精灯火焰上过一下））

（2）放入-20度冰箱冻存

（3）全部操作约需要4-6小时

查了点资料，我认为胎牛血清是不用灭灭活的。

灭活针对的是补体，补体系统的各成分，以无活性的前体存在于血浆中。需要时，再在激活物如抗原—抗体复合物等的作用下，依次被激活。

那么胎牛在离开母体前是接触不到可以做激活物的抗原的，血清里的补体是无活性的，所以就不用灭活的了。推之，小牛血清需要灭活。

不同看法，argue一下：

补体可以通过替代途径参与免疫反应，无免疫球蛋白不代表补体没有作用。 是否需要灭活主要决定于细胞培养体系能否激活补体。如果要加入一些损伤明显的因子，破坏细胞膜，暴露了糖脂，可以激活补体的。这种情况下的血清要求灭活。

小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项

来源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。 组份与比例不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。

血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时 ，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。​​​​

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