液相色谱峰拖尾原因 HPLC常见问题及对策

A、 峰拖尾1、筛板阻塞（a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱）2、色谱柱塌陷（填充色谱柱）3、干扰峰（a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱）4、流动相PH选择错误 （调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰）5、样品与填料表面的溶化点发生反应（a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、换柱子）B、 峰前延1、柱温低（升高柱温） 2、样品溶剂选择不恰当 （使用流动相作为样品溶剂）3、样品过载 （降低样品含量） 4、色谱柱损坏 （见A1、A2）C、 峰分叉1、保护柱或分析柱污染图 （取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。）2、样品溶剂不溶于流动相 （改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。）D、 峰不变形1、样品过载 （减少样品载量）E、 早出的峰不变形1、样品溶剂选择不恰当 （a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂）F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰1、柱外效应（a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路） b、使用小体积的流通池）G、 K’增加时，脱尾更严重1、二级保留效应，反相模式（a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d、更换一支柱子）2、二级保留效应，正相模式（a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法）3、二级保留效应，离子对 (加入三乙胺（或碱性样品）)H、 酸性或碱性化合物的峰拖尾1、缓冲不合适 (a、使用浓度50-100mM的缓冲液 b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液)I、 额外的峰1、样品中有其他组份 (正常)2、前一次进样的洗脱峰 (a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速)3、空位或鬼峰 (a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积)J、 保留时间波动1、温控不当 (调好柱温) 2、流动相组分变化 (防止变化（蒸发、反应等）)3、色谱柱没有平衡 (在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱)K、 保留时间不断变化1、流速变化 (重新设定流速) 2、泵中有气泡 (从泵中除去气泡)3、流动相选择不恰当 (a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相)L、 基线漂移1、柱温波动,即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。 (控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图)2、流动相不均匀,流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。(使用HPLC级的溶剂，高的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。)3、流通池被污染或有气体 (用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1M的。（不要用盐酸）)4、检测器出口阻塞,高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线 (取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗)5、流动相配比不当或流速变化 (更改配比或流速,定期检查流动相组成及流速)6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时 (用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗)7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成 （检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂）8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。（使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子）9、使用循环溶剂，但检测器未调整（重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相）10、检测器没有设定在最大吸收波长处。（将波长调整至最大吸收波长处）

采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。

注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂。